CAR-T细胞实验室设计施工方案

　　1、了解CAR-T细胞产品

　　质粒载体的制备：从工作种子库中取一个或几个菌种，复苏后逐步扩大培养，然后提取质粒，纯化除菌过滤后成为无菌质粒载体。

　　病毒载体的制备：从工作细胞库中取出一个或几个冷冻细胞，复苏合并后，在适当的培养设备中逐步扩大培养，然后加入适当比例的质粒载体转染细胞继续培养，收获培养上的清液并纯化，浓缩除菌过滤后成为无菌病毒载体的悬液。

　　CAR-T细胞的制备：将采集的细胞分离为单核细胞，然后分离、激活和转移T细胞，最后扩展、收集、洗涤和制备CAR-T细胞。

　　2、CAR-T细胞实验室设计原则

　　工厂工艺布局根据生产工艺和操作程序，各行其道，快速通畅，避免材料迂回穿梭，人员穿越岗位，尽量减少错误和交叉污染。

　　3、走道形式

　　制备质粒载体和病毒载体的车间(实验室):均为常规细菌发酵和细胞培养车间，可设计为单走道。

　　CAR-T细胞制备车间(实验室):操作人员和物品从洁净走廊进入CAR-T细胞制备单元。操作完成后，人员和物品退出污水走廊，人员退出更换房间，废物通过废物专用设施退出，成品通过成品专用设施退出。

　　4、设计重点(环境要求)

　　质粒载体和病毒载体可以在生产终端进行消毒过滤，因此发酵区和健康细胞区可以在D级环境中生产(发酵罐系统)，纯化区和病毒区需要在C级环境中生产，质粒和病毒的最终产品是无菌的，因此最终的消毒过滤和灌装需要在C+ISOLATOR或B+A环境中进行。

　　CAR-T细胞的整个制备过程不能消毒过滤。每个制备单元需要设计一个独立的B级净化空调。每个制备单元需要在制备一个人后对空调系统进行彻底消毒。为了提高制备单元的利用率，空调系统需要设置两种模式：生产模式和消毒模式。生产模式为回风运行，消毒模式为全排气，消毒气体迅速排出，消毒时间缩短。清洁走道、污垢走道等辅助房间设计为C级，通过气闸与各制备单元连接，可降低生产运行成本。